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rt pcr引物设计原则
求助miRNA QRT-
PCR引物设计
答:
miRNA
引物设计
(茎环法+染料法检测)设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上。反转录茎环通用序列:GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACmiRNA序列:>mmu-miR-99b-5pMIMAT0000132 Mus musculus miR-99...
求助miRNA QRT-
PCR引物设计
答:
miRNA
引物设计
(茎环法+染料法检测)设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上。反转录茎环通用序列:GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACmiRNA序列:>mmu-miR-99b-5pMIMAT0000132 Mus musculus miR-99...
标记Taqman探针的常用荧光基团
答:
Taqman探针的荧光基团设计对于实时
PCR
实验至关重要,其
设计原则
包括保守性、位置、长度、Tm值、命名以及评价等多方面因素。以下是关键的设计要点:1. 选择保守的100-200bp片段
设计引物
与探针,确保探针与引物在两条链上的位置布局,保证即使部分扩增也能产生荧光信号。Taqman探针应靠近上游引物,Tm值要高于...
PCR
没有模板的话会有
引物
二聚体吗
答:
自然会啊,只要有
引物
就会有DNA碱基配对,只要配对就会有二聚体。不过没有模板的
PCR
貌似除了引物二聚体不会生成别的东西
基因测序的步骤是什么?
答:
2.??纯化PCR产物可通过离子交换层析使扩增的DNA段与反应剩余的dNTP及引物分离;也可通过琼脂糖凝胶电泳,将PCR产物与非特异性扩增产物和引物分离开来;如果扩增的特异性较高时,可直接通过酚:氯仿抽提,乙醇沉淀的方法来纯化。3.??测序
引物设计原则
类似于
PCR引物设计
,可在DNA合成仪上合成20个左右的...
在做菌落
pcr
时,为什么只有
引物
带,没有目的片段啊?求大侠帮助。_百度知 ...
答:
因为没有扩增出目的片段,引起原因的可能性有好多种,
引物设计
是否合理、引物浓度是否合适、退火温度是否合适等
PCR
当中两个
引物
分别是怎么样的?具体详细的说一下。是怎么
设计
的?两个...
答:
引物
是一小段核苷酸。
PCR
中,两个引物分别与目地DNA的2条子链的两端互补,也就是如果从图的平面来看:一个引物与上一条链的左端互补,另一个引物与下一条子链的右端互补。 所以两个引物的序列是不相同的,这样才不会乱。引物的作用:有了引物分别与子链互补,那些单个的脱氧核苷酸才能够开始连接...
引物设计
时vegfa与vegfb分别是什么意思
答:
退火温度,可作为PCR退火温度的参考值,
PCR引物
如果由上海生化生工合成,建议Tm-5℃,如果由英俊合成,直接用Tm;PCR如果没有条带,建议降低退火温度(以2℃为间隔),如果条带过多或有杂带,建议升高退火温度,通常PCR使用两条引物中最小的Tm作为参考,盐浓度无需计较,暂且认为相同。
PCR
技术的原理是什么?
答:
PCR
原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对
原则
复制成同样的两分子拷贝。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸
引物
。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应...
重叠
PCR引物设计
答:
我们会发现这两条引物要比另外两条引物长很多,为什么会这样呢?这就是我们在
设计引物
的时候在A2的3端加入了20个B基因5端的序列,在B1的5端加入了20个A基因3端的序列。我们来看重叠
PCR
的步骤:(1)以A1,A2扩增A基因,B1,B2扩增B基因(2)回收A,B基因(3)以A,B为共同的模板,A1和B2为...
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